無(wú)論是選擇國(guó)產(chǎn)還是進(jìn)口的qPCR儀，首先要從儀器光學(xué)檢測(cè)的技術(shù)方案來(lái)著手，因?yàn)檫@是qPCR 儀的核心技術(shù)，它決定了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性、可靠性和重復(fù)性。

下面小編就如何選擇qpcr儀，做以下5點(diǎn)分析：

一、采用頂部檢測(cè)CCD技術(shù)

    目前來(lái)看，頂部檢測(cè)CCD技術(shù)是定量PCR儀的最佳技術(shù)方案。國(guó)內(nèi)頂尖qPCR儀和國(guó)外主流qPCR儀都采用這種技術(shù)，比如美國(guó)Thermofisher的Q5/7500，ROCHE的LC480/96，BIORAD的CFX96，以及德國(guó)JENA的qTOWER，國(guó)內(nèi)有朗基的Q1000/Q2000系列產(chǎn)品。這種頂部檢測(cè)技術(shù)采用相機(jī)原理，直接從PCR管的上方對(duì)樣品進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，采光面平行性好，采光面積大，因此小體積反應(yīng)液都能放心使用（如圖1）。

    眾所周知，采用頂部檢測(cè)技術(shù)的 qPCR儀所需要的反應(yīng)體積只需5-10ul即可，（而其他檢測(cè)方案的qPCR儀至少需要20ul以上），從而很大程度地降低了實(shí)驗(yàn)成本。實(shí)驗(yàn)達(dá)人們最清楚qPCR試劑有多貴了，能省一半的試劑就是省下大把的銀子啊。

圖1  10ul，2倍稀釋4個(gè)重復(fù)

在Q2000上獲得的結(jié)果

二、能用0.1ml白管

     經(jīng)常做實(shí)驗(yàn)的小伙伴知道，傳統(tǒng)定性PCR儀常用0.2ml透明管，所以使用0.2ml透明管成了一種習(xí)慣。但是對(duì)于定量PCR儀來(lái)說(shuō)，0.2ml透明管絕不是最佳選擇。因?yàn)闃悠肪疅o(wú)法保證始終如一的干凈，透明管也不能控制光不折射。

    這里小編要告訴你一個(gè)獲得最佳結(jié)果的訣竅——就是改變習(xí)慣，使用白管。因?yàn)椴煌该鞯陌坠苣芷帘伪尘霸胍?，即使樣品井有點(diǎn)臟都沒(méi)有關(guān)系。另外，白管還能減少光的折射損失，信噪比和靈敏度更高，因此可獲得比透明管更佳的實(shí)驗(yàn)效果。頂部檢測(cè)CCD方案絕配白管，可實(shí)現(xiàn)1+1>2的優(yōu)勢(shì)。

圖2  qPCR專(zhuān)用0.1白管

     另外，0.1ml管由于光程比0.2ml管更短，因而熒光信號(hào)更穩(wěn)定，靈敏度更高（可點(diǎn)擊查看：干貨 | 為什么qPCR高手都愛(ài)用0.1ml管？）。國(guó)內(nèi)PCR儀一線品牌朗基科儀就是采用SSLP短光程靜態(tài)熒光CCD成像技術(shù)，巧妙地將頂部檢測(cè)的光程縮小到100mm（而羅氏LC480的光程達(dá)到800mm），既可使用白管，又適用0.1ml管。這項(xiàng)創(chuàng)新技術(shù)使得朗基Q2000型96孔熒光定量PCR儀的體積更是做到了進(jìn)口同類(lèi)產(chǎn)品的一半甚至更小，大大節(jié)約了實(shí)驗(yàn)室空間。

圖3   朗基Q2000 & Q1000熒光定量PCR儀

三、升降溫速率越快越好

    無(wú)論是普通pcr儀還是熒光定量pcr儀，升降溫速率都決定了實(shí)驗(yàn)所需的時(shí)間，當(dāng)然是越快越好咯。能快速達(dá)到目標(biāo)溫度，從而縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間和提高工作效率肯定是一臺(tái)優(yōu)秀的qPCR儀應(yīng)具備的品質(zhì)。而對(duì)于PCR儀的變溫速率來(lái)說(shuō)，每秒增加1度都是半導(dǎo)體技術(shù)的一次飛躍。

四、通量越大越好

    儀器的通量，包括孔數(shù)和通道數(shù)。目前市場(chǎng)上有8孔、16孔、48孔、96孔，還有384孔，通道數(shù)有二通道、四通道、五通道和六通道可以選擇。那我們應(yīng)該怎么選呢？！

    買(mǎi)產(chǎn)品并不只為當(dāng)下需要，更多的要考慮未來(lái)，當(dāng)然是孔數(shù)越多越好，通道數(shù)越多越好。無(wú)論是科學(xué)研究還是疾病診斷，都會(huì)越來(lái)越多地使用高通量熒光定量PCR儀。需要注意的是，有些進(jìn)口廠家的儀器只對(duì)自家生產(chǎn)的多通道染料開(kāi)放，所以有較大的局限性，選擇時(shí)需謹(jǐn)慎。

五、軟件功能越多越好

    要說(shuō)硬件是骨，軟件就是血肉靈魂。出色的軟件不僅賦予儀器齊全的功能、簡(jiǎn)便的操作，還能帶來(lái)美好的客戶(hù)體驗(yàn)和完善的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。相對(duì)定量、絕對(duì)定量、熔解曲線、基因分型（SNPs）和陰陽(yáng)性判定這些都是qPCR軟件必不可少的功能，如果有HRM和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析模式功能那就更完美了。

    在了解完這幾點(diǎn)之后，相信大家都能買(mǎi)到一臺(tái)稱(chēng)心如意的qPCR儀了。

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